凯盈线上娱乐可以吗:人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒及克隆

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介紹

人類第19號染色體上的 AAVS1(又名為 PPP1R2C 位點)是一個經過驗證、能確保轉入 DNA 片段預期功能的“安全港”位點。該位點是一個開放的染色體結構,能保證轉入基因能被正常轉錄。另外很重要的一點是在該位點插入外源基因片段對細胞無已知的副作用。

靶向 AAVS1 位點的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 體系能特異剪切人類第19號染色體上的 AAVS1 位點,生成DNA雙鏈斷裂(DSB),觸發DNA的自然修復機制,誘導位點與 AAVS1 供體 DNA 克隆之間發生同源重組(HR),將供體克隆上的 DNA 片段整合到基因組上的 safe harbor 位點。

 
購買 貨號 產品 描述 目錄價 促銷價
SH-AVS-K000 Genome-TALER™ 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒(不含載體) 包括:
AAVS1 TALEN 組合(TN-AAVS1 )
AAVS1 陽性對照供體克隆 (DC-RFP-SH01)
基因敲入驗證引物組合(HQPAVSHR)
(HQPAVSHR)
9560 5730
SH-AVS-K002 Genome-CRISP™ 人類AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒(不含載體) 包括:
AAVS1 sgRNA/Cas9 表達克隆 (HCP-AAVS1-CG02)
AAVS1 陽性對照供體克隆 (DC-RFP-SH01)
基因敲入驗證引物組合(HQPAVSHR)
9560 5730
SH-AVS-K100 Genome-TALER™ 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒t 包括:
AAVS1 TALEN 組合(TN-AAVS1 )
AAVS1 供體克隆載體 (DC-DON-SH01))
AAVS1 陽性對照供體克隆 (DC-RFP-SH01)
基因敲入驗證引物組合(HQPAVSHR)
11160 6680

 

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EZ012 AAVS1 Cas9 knock-in clone AAVS1 Gateway 供體載體,可裝載外源ORF并將其敲入safe harbor位點。。 3400
SH100 AAVS1 sgRNA/Cas9 clone 靶向剪切人類19號染色體的AAVS1位點。(舊貨號:HCP-AAVS1-CG02) 7160
SH125 AAVS1 TALEN clone 靶向剪切人類19號染色體的AAVS1位點。(舊貨號:TN-AAVS1) 7160
SH308 AAVS1 positive control clone 將RFP熒光蛋白敲入人類19號染色體上的AAVS1位點,作為對照。(舊貨號:DC-RFP-SH01) 3960
SH400 AAVS1 safe harbor 5端重組驗證引物 通過PCR驗證人類AAVS1 safe harbor基因敲入的5端重組區。(舊貨號:HQPAVSHR-5) 200
SH401 AAVS1 safe harbor 3端重組驗證引物 通過PCR驗證人類AAVS1 safe harbor基因敲入的3端重組區。(舊貨號:HQPAVSHR-3) 200

 

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SH300 AAVS1 Cas9 knock-in clone ORF區為 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 AAVS1 safe harbor 位點。 4000
SH301 AAVS1 Cas9 knock-in clone ORF區為 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 AAVS1 safe harbor 位點。 4000
SH302 AAVS1 Cas9 knock-in clone ORF區為 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 AAVS1 safe harbor 位點。 4000

 

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SH401 AAVS1 safe harbor 3端重組驗證引物 通過PCR驗證人類AAVS1 safe harbor基因敲入的3端重組區。(舊貨號:HQPAVSHR-3) 200
SH403 Cas9 AAVS1 safe harbor 敲入 5 端重組驗證引物 通過PCR驗證人類AAVS1 safe harbor Cas9 基因敲入的5端重組區。 200

 

購買 Catalog Product Name Description Price
SH012 Genome-CRISP™ Cas9 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒 - Puro 包括:
AAVS1 sgRNA/Cas9 表達克隆 (SH100)
Cas9 AAVS1 敲入克隆 - Puro (SH300)
敲入驗證引物組合(SH401 & SH403)
12760
SH013 Genome-CRISP™ Cas9 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒 - Hygro 包括:
AAVS1 sgRNA/Cas9 表達克隆 (SH100)
Cas9 AAVS1 敲入克隆 - Hygro (SH301)
敲入驗證引物組合(SH401 & SH403)
12760
SH014 Genome-CRISP™ Cas9 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒 - Neo 包括:
AAVS1 sgRNA/Cas9 表達克隆 (SH100)
Cas9 AAVS1 敲入克隆 - Neo (SH302)
敲入驗證引物組合(SH401 & SH403)
12760
SH037 Genome-TALER™ Cas9 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒 - Puro 包括:
AAVS1 TALEN 組合 (SH125)
Cas9 AAVS1 敲入克隆 - Puro (SH300)
敲入驗證引物組合(SH401 & SH403)
12760
SH038 Genome-TALER™ Cas9 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒 - Hygro 包括:
AAVS1 TALEN 組合 (SH125)
Cas9 AAVS1 敲入克隆 - Hygro (SH301)
敲入驗證引物組合(SH401 & SH403)
12760
SH039 Genome-TALER™ Cas9 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒 - Neo 包括:
AAVS1 TALEN 組合 (SH125)
Cas9 AAVS1 敲入克隆 - Neo (SH302)
敲入驗證引物組合(SH401 & SH403)
12760

 

貨號 產品 描述 目錄價
多種 人類 AAVS1 ORF 敲入克隆 由 CMV 啟動子啟動 ORF 表達。能將 ORF 或您的目的基因敲入人類 AAVS1 safe harbor 位點。

 

TALEN 試劑盒

Genome-TALER™ 人類 AAVS1 Safe Harbor 基因敲入試劑盒

試劑盒專為轉基因實驗設計,能通過 TALEN 介導的同源重組將您感興趣的基因、篩選標記或其他遺傳因子轉入位于人類第19號染色體上的AAVS1 safe harbor位點。 試劑盒包含一對 AAVS1 TALEN 質粒,一個 AAVS1 供體載體或一個供體克隆質粒*,一個陽性對照供體克隆質粒以及兩對基因敲入PCR 驗證引物組合。

(A)  
AAVS1_Left_TALEN-m AAVS1_Right_TALEN-m
     
AAVS1_Donor_clone-m AAVS1_Donor_control-m  
(B)

 

圖1. Genome-TALER™ 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒。該試劑盒包含(A)  (B) 。(A) AAVS1 TALEN 及供體 DNA 質粒;(B) AAVS1 基因敲入驗證 PCR 引物組合。

組成 描述 數量

AAVS1 TALEN 組合 – AAVS1左側 TALEN 及AAVS1右側 TALEN

特異剪切AAVS1靶標位點,產生雙鏈斷裂

1  對

AAVS1 供體載體

AAVS1 供體克隆*

用于克隆或已裝載目標基因–兩側帶有AAVS1同源重組位點

-含CMV啟動子

-GFP報告基因/嘌呤霉素篩選標記

1

AAVS1 陽性對照供體克隆

裝載RFP而非目標基因。用作陽性對照。

1

基因敲入驗證引物組合

對同源重組連接位點進行擴增的PCR引物組合,用于驗證成功整合的克隆

2  對

* 客戶可另外搜索和訂購感興趣的 AAVS1 ORF 敲入克隆,或定制其他 AAVS1 供體克隆。該供體克隆可取代原來的空白AAVS1供體載體隨試劑盒發貨。

 

(A) (B)
The_comparison_chart1-s
(C)
(D)
 

圖2. 人類基因組 AAVS1 safe harbor 基因敲入(A) 于6孔板中用AAVS1 供體對照質粒DC-RFP-SH01 (800 ng) 與AAVS1 TALEN 克隆組合(600 ng 每個質粒) 或TALEN對照組共轉染 HEK293T 感受態細胞. (B) 轉染48小時后,將細胞以1:10比例分。配到新的6孔板,用1.0 µg/ml 濃度的嘌呤霉素進行篩選該圖于篩選進行兩周后拍攝。 DC-RFP-SH01  + TALEN對照組的板孔內只余極少量細胞。 (C) (D) 設計引物組合對同源重組連接位點進行擴增,驗證成功整合的克隆。

 

鳴謝: AAVS1 左側及右側TALEN克隆, 以及AAVS1 供體對照載體由美國國家衛生研究院再生醫學中心的Dr. Jizhong Zou 設計。

CRISPR 試劑盒

Genome-CRISP™ 人類 AAVS1 Safe Harbor 基因敲入試劑盒

試劑盒專為轉基因實驗設計,能通過 CRISPR-Cas9 介導的同源重組將您感興趣的基因、篩選標記或其他遺傳因子轉入位于人類第19號染色體上的AAVS1 safe harbor位點。 試劑盒包含1個 AAVS1 sgRNA/Cas9 表達克隆,1個 AAVS1 供體克隆載體或供體克隆*,1個陽性對照供體克隆及兩對基因敲入PCR 驗證引物組合。

 

(A)    

AAVS1_Donor_clone-m

     
AAVS1_Donor_clone-m AAVS1_Donor_control-m  
(B)

圖3. Genome-CRISP™ 人類 AAVS1 safe harbor 基因敲入試劑盒。該試劑盒包含(A)  (B) 。(A) AAVS1 sgRNA/Cas9 表達克隆及供體DNA質粒;(B) AAVS1 基因敲入驗證PCR引物組合。

組成 描述 數量

AAVS1 sgRNA/Cas9 表達克隆

表達 sgRNA 及 Cas9 核酸內切酶特異剪切 AAVS1 位點,生成雙鏈斷裂

1

供體克隆載體

AAVS1 供體克隆*

用于克隆或已裝載目標基因–兩側帶有AAVS1同源重組位點

-含CMV啟動子

-GFP報告基因/嘌呤霉素篩選標記

1

AAVS1 陽性對照供體克隆

裝載RFP而非目標基因。用作陽性對照。

1

基因敲入驗證引物組合

對同源重組連接位點進行擴增的PCR引物組合,用于驗證成功整合的克隆。

2  對

* 客戶可另外搜索和訂購感興趣的 AAVS1 ORF 敲入克隆,或定制其他 AAVS1 供體克隆。該供體克隆可取代原來的空白AAVS1供體載體隨試劑盒發貨。

敲入克隆

人類 AAVS1 Safe Harbor ORF 敲入克隆是裝載客戶感興趣的基因 ORF 的 AAVS1 供體克隆。該供體克隆可搭配 Genome-TALER™ 或 Genome-CRISP™ 人類 AAVS1 Safe Harbor 基因敲入試劑盒使用,將客戶感興趣的 ORF 特異敲入位于人類第19號染色體上的 AAVS1 位點。試劑盒中的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 體系靶向剪切 AAVS1 位點, 產生 DNA 雙鏈斷裂(DSB),使該位點發生同源重組(HR)。目前這一系列敲入克隆有超過20,000條序列確證的人類 OFR 可供選擇。

 

AAVS1_Donor_clone-m

 

圖4. 人類 AAVS1 Safe Harbor ORF 敲入克隆質粒圖譜

 

圖5. SOX2及OCT4基因敲入人類基因組safe harbor AAVS1 位點實驗。(A)在六孔板上將OCT4(Cat#: DC-Z0092-SH01) 或SOX2(Cat#: DC-T2547-SH01) 供體質粒與AAVS1 TALEN組合共轉染到HEK293T細胞。轉染48小時后細胞傳代,以嘌呤霉素(1µg/ml)篩選2周。轉染48小時或篩選2周后用顯微鏡(Nikon Eclipse Ti ) 檢查CopGFP的表達情況。只用供體質粒轉染的對照組在嘌呤霉素篩選后只有少量細胞存活(數據未展示)。(B)對AAVS1位點穩定整合SOX2(Cat#: DC-T2547-SH01) 或 OCT4 (Cat#: DC-Z0092-SH01) 的HEK293T細胞進行分析。同個印跡實驗中,陰性對照(未經轉染的HEK293T細胞)的內源SOX2或OCT4蛋白水平低至無法檢出。

 

AAVS1 供體克隆客戶定制服務 

GeneCopoeia 也提供 AAVS1 供體克隆客戶定制服務,為客戶構建含有突變基因或其他遺傳因子的敲入克隆,用于針對 AAVS1 位點的基因敲入實驗。請點擊這里詢價。

如有進一步疑問,請致信 [email protected] 或致電 4006-020-200 咨詢。

服務

AAVS1 供體克隆客戶定制服務 

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AAVS1 穩轉細胞株服務 

服務 描述 應用

穩轉細胞株服務

單克隆細胞株

帶有TALEN 或CRISPR-Cas9 介導的safe harbor 位點基因敲入單克隆穩轉細胞株。

人類 AAVS1

細胞庫

為帶有TALEN 或 CRISPR-Cas9 介導的 safe harbor 位點基因敲入單克隆穩轉細胞株建庫。

人類 AAVS1

 

如有進一步疑問,請致信 sales@igenebio.com或致電 4006-020-200 咨詢。

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Genome-CRISP™ CRISPR-Cas9 產品及服務 –   GeneCopoeia提供CRISPR-Cas9 sgRNA 設計及克隆服務,Cas9表達克隆和其他相關產品及服務,為客戶實現簡便快捷的靶向基因組編輯。

 

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