墨尔本线上娱乐:MethylAffinity™ Methylated DNA Enrichment Kit — 甲基化DNA富集試劑盒

MethylAffinity™ Methylated DNA enrichment kit提供了一種以GCM™磁珠法從全基因組中快速富集甲基化DNA片段的方法。濃縮后的甲基化DNA片段可提高下游實驗與分析的效果,例如RT-PCR、微陣列、測序等甲基化狀態和定位研究的方法。

以基因工程方法獲得的GCM重組蛋白是一種具有甲基結合功能域(MBD)的蛋白,可與含有甲基化CpG雙核苷酸的雙鏈DNA特異的結合,比野生型MBD具有更高的親和性和特異性。

實驗流程

產品優勢

更少的步驟和更少的時間

  • 整個實驗過程不足2個小時
  • 固定化的GCM™重組MBD蛋白,無需再進行填料-MBD的固定化反應
  • 可結合雙鏈CpG甲基化DNA,樣品基因組DNA無需變性
  • 可快速洗脫產物,無需蛋白酶處理
  • 洗脫產物可立即用于RT-PCR等下游檢測

高親和力

  • 親和力高于其他商業化MBD蛋白
  • 可富集分離僅有幾個拷貝的甲基化CpG雙核苷酸
  • 可處理納克級的基因組DNA

梯度洗脫

  • 為精確研究甲基化狀態,可結合NaCl梯度洗脫,GCM™-Bead能分離具有不同CpG位點密度的DNA片段

操作簡便

  • 具有鮮艷的紅色,比傳統的sepharose Bead更有效地避免清洗過程中的損失
  • 試劑盒提供的限制性內切酶可用于基因組DNA的片段化
 
圖1. 100ng小鼠基因組DNA與5µlGCM™-Bead室溫結合 1小時,經binding buffer 清洗4次,最后用Elution buffer 洗脫甲基化DNA。收集結合后上清物(Wash)及洗脫物(Elution), 用小鼠β-acting Promoter primer(甲基化陰性對照)、小鼠 GAPDH Promoter primer(甲基化陰性對照)及小鼠IAP primer (甲基化陽性對照)進行PCR檢測。β-acting Promoter primer 及GAPDH Promoter primer擴增帶只出現在結合后上清物中, 而IAP primer的擴增帶則出現在洗脫物中。   圖2. 左邊為sepharose,右邊為GCM™-Bead。與傳統的sepharose Bead相比較,GCM™-Bead更容易辨認,在清洗過程中有效避免損失。

 

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FF003 利用GCM™磁珠法從全基因組中快速富集甲基化DNA片段 (30次) GCM-beads based method for quick enrichment of double-stranded DNA fragments containing methylated CpG dinucleotides from whole genome. 3980

 

 

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DNA甲基化背景

DNA甲基化在哺乳動物參與許多細胞過程和負責招聘的基因沉默的轉錄鎮壓復合物。它在發育中起著至關重要的作用。然而在癌癥中,啟動子區域的大量甲基化經常被觀察到,因此而導致腫瘤抑制基因和DNA修復基因的轉錄抑制。