宝马线上线上娱乐官网:OmicsLink™ shRNA表達克隆

產品介紹

GeneCopeia提供病毒和非病毒載體的人、小鼠和大鼠全基因組OmicsLinkshRNA表達克隆,shRNA序列經專利算法設計包括莖(19-29對核苷酸)和環,確保高效的抑制作用和最低的脫靶效應。

shRNA抑制效率保證

對于構建到慢病毒和哺乳動物載體的shRNA克隆,我們針對每個基因提供4個克隆,保證至少有1個克隆通過qRT-PCR檢測對靶基因的表達抑制水平達到70%以上。

靶向任意細胞

使用慢病毒和非病毒載體系統,既可以轉染或轉導shRNA進入常規的分裂細胞,也可以進入難轉染的非分裂細胞,如原代細胞、神經元細胞等。

靈活的載體選擇

每個shRNA克隆提供5 µg純化質粒,也提供客戶定制的慢病毒載體的shRNA克隆。定制該克隆,請填寫表格。

標簽及報告基因

載體中帶有的mCherry和eGFP報告基因可以用于監測轉染和轉導效率,嘌呤霉素標記可用于穩定細胞系的篩選。

全長測序的表達框架

載體的插入序列已經過測序,包括啟動子、編碼shRNA的正義和反義鏈、發夾結構、終止子和其他接頭序列。

 

Lentiviral and non-viral expression vector-based shRNA clones

圖1. shRNA克隆的病毒和非病毒表達載體

 

應用

產品應用

 

基因表達下調 — 以包含無義序列的克隆為對照,研究shRNA克隆對單個基因表達的下調效果。在每個shRNA克隆訂單中贈送對照克隆。

信號通路研究我們將克隆按照不同的信號傳導、代謝、疾病通路、基因家族等進行了分類,并將已知同一通路的shRNA表達克隆以96孔或384孔板的形式排列在一起,可一次研究一組基因在某一信號通路中的功能。目前我們提供針對人類全部激酶基因的shRNA表達克隆,并已按照按不同激酶的功能進行了分類。

靶點及功能驗證 — OmicsLink™ ORF表達克隆和在shRNA靶序列帶有沉默突變的ORF表達克隆一起使用可用于shRNA靶點驗證和基因功能拯救研究。

 

shrna plasmids knockdown

圖2. shRNA抑制基因表達的機制

 

shRNA表達克隆對基因表達抑制效應的檢測方法

 

qRT-PCR — shRNA克隆的表達能導致靶標基因所轉錄的mRNA被切割和降解,從而降低蛋白的表達量。所以推薦檢測表達抑制效率的第一步是qRT-PCR。GeneCopeia提供驗證過的對應靶標基因和其他已報導的轉錄本的qRT-PCR引物。

Western Blot檢測大部分情況下,檢測shRNA對基因表達的抑制效率需要用Western Blot方法來檢測蛋白表達水平。

功能檢測檢測表達抑制效率還可用生物和生化的終點分析方法,如細胞增殖、克隆形成、細胞周期、細胞遷移等。

報告基因檢測表達水平 — 當研究的靶標基因內源轉錄水平很低,且不適宜使用qRT-PCR和WB檢測時,表達抑制效率的檢測也可通過共轉導shRNA克隆和一個含靶標基因并帶了報告基因的表達克隆,檢測報告基因的表達水平即可。靶基因的mRNA遭shRNA的破壞,同時導致了報告基因的mRNA遭破壞,從而表現為報告蛋白的表達量下降。因而表達抑制效率可以用報告蛋白的酶活性分析結果來進行量化。

Validation of shRNA against human kinome members

圖3. shRNA(psi-sH1載體)對人激酶家族成員表達抑制效率的驗證。psiCheck-AP載體以CMV為啟動子,包括靶標激酶的ORF區和用于比色實驗的堿性磷酸酶(AP)基因。A. 通過比色實驗量化AP在沒有shRNA的情況下的表達。B. 共轉染shRNA和AP ORF表達克隆后,AP ORF的轉錄本被降解,AP基因翻譯受阻導致熒光消失。

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載體

OmicsLink shRNA表達克隆載體  

載體 啟動子 篩選標記 報告基因 病毒類型
psi-H1 H1 Puromycin eGFP N/A
psi-U6 U6 Puromycin eGFP N/A
psi-mH1 H1 Puromycin mCherry N/A
psi-mU6 U6 Puromycin mCherry N/A
psi-nH1 H1 Puromycin N/A N/A
psi-nU6 U6 Puromycin N/A N/A
psi-LVRH1GP H1 Puromycin eGFP HIV
psi-LVRU6GP U6 Puromycin eGFP HIV
psi-LVRH1MP H1 Puromycin mCherry HIV
psi-LVRU6MP U6 Puromycin mCherry HIV
psi-LVRH1P H1 Puromycin N/A HIV
psi-LVRU6P U6 Puromycin N/A HIV
psi-LVRU6GH U6 Hygromycin EGFP HIV
psi-LVRH1GH H1 Hygromycin EGFP HIV
psi-LVRU6MH U6 Hygromycin mcherry HIV
psi-LVRH1MH H1 Hygromycin mcherry HIV
psi-LVRU6H U6 Hygromycin N/A HIV
psi-LVRH1H H1 Hygromycin N/A HIV

 

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預制的shRNA克隆套裝

GeneCopeia提供載體可選的超過24,000條人、20,000條小鼠和10,000條大鼠預制的shRNA克隆套裝。

 

慢病毒載體的shRNA表達克隆

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